前沿文献 | 不同方法学在鉴定与眼前段葡萄膜炎相关的继发性青光眼患者病毒感染中的临床应用价值

引言

复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科青光眼与视神经疾病学科主任孙兴怀教授、陈宇虹教授团队（第一作者王丽）联合华大基因相关科研团队于《Ocular Immunology and Inflammation》（JCR分区：Q3，2020 IF：3.070）期刊发表一篇单中心研究，评估比较了不同方法学在鉴定葡萄膜炎继发青光眼患者病毒感染中的临床应用价值，结果发现病毒是引起葡萄膜炎继发青光眼的重要病原体，宏基因组测序技术在寻找引起葡萄膜炎继发青光眼的病毒方面具有非常大的临床应用潜力。

注：涉及到的相关名词简写

PSS：波斯纳-施洛斯曼综合征；FHI：Fuchs综合征，异色性虹膜睫状体炎；AU：前葡萄膜炎；HCMV：巨细胞病毒；HSV：人单纯疱疹病毒；RV：风疹病毒。

研究方法

01

入组标准

患者符合以下所有标准：

1) 轻度前房炎症反复发作；

2) 角膜内皮角质沉淀物；

3) 发作期间眼压升高（超过21mmHg）；

4) 瞳孔周围前粘连和后粘连缺失。

对照组

无眼内炎症史、其他眼部疾病史或全身性疾病史的老年白内障患者。

除外标准

1) 有眼外伤、眼科手术或全身性疾病史的患者。

2) 获得性免疫缺陷综合征（AIDS）患者和其他免疫功能低下的个体。

3) 被怀疑或曾经被诊断为由细菌或真菌感染引起的角膜炎或葡萄膜炎的患者。

02

样本采集及检测方法

所有入选患者和对照组患者均行前房穿刺，收集房水进行WDC评估、qPCR检测、宏基因组测序等病原相关检测；采集外周血分离血清进行病原抗体检测。

WDC为评估眼内感染风险指标，如果特异性眼内IgG呈阳性且WDC值大于4，则认为是眼内特异性IgG的产生是在眼睛中合成的而不是来自全身循环，即眼内感染。

WDC=[房水中IgG/血清中IgG]/[房水中白蛋白/血清中白蛋白]

研究结果

01

病例临床特征

2017年3月至2017年12月共入组31例，其中波斯纳-施洛斯曼综合征（PSS）22例、Fuchs综合征-异色虹膜睫状体炎（FHI）1例、其他葡萄膜炎性青光眼8例。从老年白内障患者中采集9份对照标本。表1为所有登记病例的临床特征。

02

病例典型眼部特征及相关结果

①HCMV阳性PSS患者的典型临床特征，包括虹膜脱色和羊脂角质沉淀物。（图1a、b）

②几乎所有HCMV阳性的PSS患者在病程中都出现羊脂角质沉淀物，57.1%（8/14）的HCMV阳性PSS患者的患眼出现斑片状或弥漫性虹膜脱色。VZV阳性患者的特征是虹膜斑片状脱色和瞳孔扭曲。（图1c、d）

③其中一名患者伴有基质性角膜炎。仅在一名诊断为FHI的年轻男性患者中发现RV抗体。患者患有星状、色素沉着和白色角质沉淀物（Kp），虹膜弥漫性色素脱失和异色，以及难治性青光眼。此患者进行了一次小梁切除术，随后植入Ahmed瓣膜以控制眼压。（图1e、f）

④ 在入组患者中均未检测到HSV或多重病毒感染情况。

03

检测结果

1. WDC结果总体阳性率（WDC＞4）为61.3%（19/31），其中包括15例HCMV、3例VZV和1例RV。WDC在PSS患者中HCMV病毒检出阳性率为63.6%（14/22）

2. 对26例房水标本（19例PSS、6例AU和1例FHI）进行实时qPCR评估，其中5例（5/26，19.2%）病毒检测结果呈阳性。

3. 病原宏基因组测序在3例WDC阳性的PSS患者中检出HCMV（3/31，9.7%），其中2例qPCR结果也为阳性。 

结果讨论

眼前段葡萄膜炎通常表现为急性单侧眼痛、红肿、视力模糊、畏光和流泪，或慢性无症状或轻度视力模糊。当眼前段葡萄膜炎伴有眼压升高或虹膜色素异常时，常怀疑病毒病因。波斯纳-施洛斯曼综合征（PSS）的特征是复发性眼内高压性周期炎，如果不治疗，最终会导致青光眼性视神经病变。前期研究中心发现PSS患者的总体病毒检测率从26.4%到52.2%不等。

本研究中三种技术都成功地检测到PSS中的HCMV。ELISA联合WDC的阳性率为63.6%（14/22），qPCR阳性率9.1%（2/22），宏基因组测序阳性率13.6%（3/22）。总体病毒检出率高于之前的研究，这与入组标准有很大关系。本研究中登记的患者有典型的眼压升高和虹膜改变的PSS临床表现，病毒感染的指征显著。虽然宏基因组测序技术的敏感性还需进一步提高，但其在寻找引起葡萄膜炎继发青光眼的病毒方面具有非常大的潜力。

小编记

在该研究中发现宏基因组测序法对于HCMV的检出率要低于ELISA联合WDC的方法。根据最新发表的《感染性眼病的病原微生物实验室诊断专家共识》中感染性眼病病原学诊断路径的推荐，对于怀疑感染性眼病的患者建议完善常规病原学检测方法，常规检验无法满足实验室诊断时，可选择宏基因组测序技术。该技术的无偏倚性使其成为未知病原体识别的重要手段。（指南共识 | 感染性眼病的病原微生物实验室诊断专家共识）因此当临床中重点怀疑病毒感染引起的眼部感染时应建议优先进行常规的病毒核酸及抗体检测，宏基因组学的方法学优势在于混合感染、未知、少见病原感染的检测。

参考文献：

Wang Li,Wang Zhujian,Ma Jinmin et al. Comparison of Intraocular Antibody Measurement, Quantitative Pathogen PCR, and Metagenomic Deep Sequencing of Aqueous Humor in Secondary Glaucoma Associated with Anterior Segment Uveitis.[J] .Ocul Immunol Inflamm, 2022, 30: 153-159.

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